仪器和耗材选择
1、直接比色法。酶活性检测的方法指导书或试剂盒说明书中,写有用分光光度计、分光光度计或酶标仪检测的都属于直接比色法。
仪器:分光光度计、紫外-可见分光光度计、酶标仪、全波长酶标仪等;
耗材:玻璃比色皿、石英比色皿、微量石英比色皿(0.2mL、0.8mL、1.2mL等规格)、一次性比色皿(常用Fisherbrand 1.5mL)、酶标板、石英酶标板、UV酶标板等;
仪器和耗材的选择,见图一。
说明1:酶标仪指可替换滤光片的多通道酶标仪。根据所测波长,选择合适波长的滤光片,波长偏差在10nm以内。
说明2:全波长酶标仪最好选用多通道酶标仪,在下面建议中会详细说明。
说明3:微量比色皿有多种规格,根据反应液体积选择合适的规格,要求反应液体积要大于等于比色皿最大体积的三分之二。
说明4:石英酶标板价格较高,易磨损,磨损后影响测定结果,通常不建议使用。
建议1:实验操作不娴熟的小伙伴,建议用分光光度计/紫外-可见分光光度计,因为他俩的光程是固定的,可以避免光程误差(酶标板加样不规范会有光程误差,影响结果),而且反应体系也大,可以减少加样量的误差。
建议2:实验操作很娴熟的小伙伴,可以选用酶标仪/全波长酶标仪。既然选用了酶标仪,肯定想提高实验效率,建议用多通道酶标仪(8通道或者12通道)。实验中配合多通道移液器,在酶标仪上建立好程序,一次8个样或12个样,岂不美滋滋,注意要做重复哦。另外,注意移液器的加样顺序要和酶标仪的通道数保持一致,8通道要整列加样,12通道要整行加样。
建议3:单通道酶标仪,还是不建议使用了,同时测定多个样品会有误差,无法保证所有样品的反应时间完全一致,还不如用分光光度计/紫外-可见分光光度计,毕竟误差小一些。实验室没有分光光度计的小伙伴可以选择使用。
2、酶联免疫法(ELISA)。酶活性检测的方法指导书或试剂盒说明书中,写有Elisa、双抗体一步夹心法、HRP标记等字样的都属于酶联免疫法。波长多为450 nm。
仪器:酶标仪、全波长酶标仪等;
耗材:酶标板、石英酶标板、UV酶标板等;
建议耗材:酶标板。