植物产生的主要激素有细胞分裂素(CK)、水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)、赤霉素(GA)、乙烯(ET)等。细胞分裂素在促进植物细胞扩展、分化、增殖等方面发挥着生长调节作用;生长素在植物发展过程中都发挥着重要作用;水杨酸茉莉酸可以参与植物根的发育,还可抑制病原物在植物体内的增殖从而增强抗病性。
植物内源激素是植物体内的一种微量有机物质,可调节植物从胚胎发育、器官生成、生物防御、胁迫耐受到生殖发育等各个方面的活动。植物内源激素在植物各器官中呈现动态分布,性质不稳定,且含量极少,因此其测定方法既要精确又要灵敏。通常先选用合适的有机溶剂对其进行提取,然后采用萃取或层析得到部分净化,再测定其含量。
目前,植物内源激素的测定方法主要包括生物测定法、气相色谱法、超高效液相色谱法、气相色谱质谱联用法、液相色谱质谱联用法等几种检测方法。其中,超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS)由于其具有分辨率高、检出限低、高效灵敏等优点,目前已成为植物激素最重要的分析方法。我们通过对叶菜类植物样品前处理方法、色谱质谱条件等方面摸索优化,现有操作简单、准确性高、重现性好的较成熟方法,UPLC-MS同时测定植物组织中SA、JA、IAA、ABA等17种植物内源激素的含量。
实验方法的优化,首先对前处理条件的对比,不同的提取方式(超声和震荡),提取时间长短。有研究显示,植物内源激素的化学结构和化学性质差异较大,且周围共存的基体成分也比较复杂,对温度等外界条件敏感,在各器官中呈现一定的动态分布。因此在该试验过程中,前处理提取方式及外界试验环境对试验结果至关重要。影响较大的因素主要包括光环境、是否充分提取等。在固相萃取的整个过程中,流速的控制以及洗脱的速度对试验结果的影响均极大。